可能存在的原因有：

1. 試劑盒儲存不當或儲存環(huán)境差。您應按照數(shù)據(jù)表上的建議儲存所有組分，而不是在室溫下過長時間。

2. 標準的制備不正確。您應根據(jù)試劑盒的方案，使用推薦的稀釋劑嚴格重構標準。在使用前的10分鐘內準備好試劑，并迅速加入孔中。

3. 添加樣本后混勻不充分。當同時添加多個試劑時，您應在渦旋混合器中充分混合試劑。在持有試劑時要小心，避免濺出。

4. 孔讀數(shù)重復性差。您應校準酶標儀。

5. 孵育時間、洗滌條件、顯色條件和操作者不一致。您應重復標準的實驗。確保反應條件和操作者一致。

6. 洗滌不當。您應使用移液管加入200μL的洗滌緩沖液，或者用移液管充分填滿每個孔，但不允許溢出。檢查酶標板洗滌器的所有孔口，確保充分的洗滌。

7. 溫度不均勻。您應在孵育期間保持恒定溫度，避免溫度波動。

8. 加樣本時壁面殘留過多或移液管尖劃傷孔底。您應緩慢、小心地將移液管尖沿孔壁降低，避免觸碰孔底。

9. 重復使用材料。您應在樣本之間更換移液管尖，在試劑之間更換儲液器。

10. 偶爾在截斷值附近出現(xiàn)的陽性和陰性值。您應對同一樣本設置3個重復測量，并在2個樣本中獲得相同的結果。

11. 加樣本時的交叉污染。您應在添加樣本時避免交叉污染。